TEMAS DE INTERÉS
Reacción en Cadena de la Polimerasa o PCR
Existen diversas técnicas de biología Molecular para realizar diagnóstico molecular:
- Southern, Northern y Slot Blots
- FISH (hibridación in situ)
- Captura de Híbridos
- PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) y sus variantes
- NASBA (Amplificación de Ácidos Nucléicos basada en secuencia a partir de -ARN)
- Genómica
La técnica que más utilizamos en BIMoDI es la PCR o Reacción en Cadena de la Polimerasa y sus variantes.
La PCR amplifica cantidades diminutas de ácidos nucléicos y genera millones de copias idénticas de la secuencia del ADN o ARN blanco en cuestión de horas. Esto permite tener una alta sensibilidad (entre un 90%-100%) y una gran especificidad (más del 95%).
La amplificación del ácido nucléico o PCR se lleva a cabo en un termociclador, que es un instrumento que permite que las reacciones ocurran a las distintas temperaturas requeridas. En el paso inicial del procedimiento, los ácidos nucléicos son extraídos del microorganismo o espécimen clínico de interés. Una vez extraídos, éstos son sometidos a una replicación mediante el uso de la enzima ADNpolimerasa, este proceso es repetido numerosas veces en el termocicaldor. Al final de cada ciclo cada una de las secuencias de ADN recién sintetizadas sirve como templado para el siguiente ciclo, por lo que después de 30 ciclos se han creado millones de copias del ADN blanco original. El resultado es el acumulamiento de productos específicos de la PCR.
La detección de los productos amplificados puede realizarse mediante: la electroforesis de los productos en un gel de agarosa, un formato de inmunoensayo utilizando una detección colorimétrica basada en una sonda o la tecnología de emisión de fluorescencia.
Biología Molecular Diagnóstica
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